e1a ji yin dui bi yan ai fang she min gan xing ying xiang dong wu shi yan yan jiu

目的 大部分鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)具有高表达核转录因子kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的特征,而后者与细胞凋亡途径相关,可能导致鼻咽癌对放射不敏感。本研究探讨E1A基因对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及其可能机制。方法 取对数生长期的CNE-2细胞1×107 mL-1,接种于6周龄左右裸鼠左后肢腹股沟部皮下致瘤,当裸鼠移植瘤长至直径(8±0.5)mm时,随机分为4组(n=10):Ad-β-gal组(Control组),Ad-E1A组(Ad-E1A组),放射组(RT组),Ad-E1A+放射组(Ad-E1A+RT组)。观察E1A基因联合放射对鼻咽癌裸鼠移植瘤的治疗效果;RT-PCR检测E1A基因对NF-κB表达的影响;凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测E1A基因对NF-κB活性的影响;蛋白质印迹法检测NF-κB、cIAP-1、cIAP-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平;TUNEL分析肿瘤细胞的凋亡水平;免疫组化分析Ki-67的表达。结果 与Control组相比,RT组、Ad-E1A组和Ad-E1A+RT组均可抑制裸鼠移植瘤的生长,抑瘤率平均值分别为(35.87±4.58)%、(40.68±4.16)%和(89.15±4.63)%;与RT组相比,Ad-E1A+RT组的抑瘤率为(74.3±3.21)%。鼻咽癌细胞无内源性的E1A表达,E1A基因能够在鼻咽癌移植瘤内稳定表达并且能够抑制NF-κB的表达;EMSA进一步证实了NF-κB活性的下降。蛋白质印迹法实验显示,Ad-E1A+RT组的NF-κB、cIAP-1和cIAP-2蛋白表达较RT组明显下降(P<0.05),Ad-E1A+RT组的Cleaved Caspase-3表达水平明显高于RT组,P<0.05。TUNEL分析结果显示,Control组、RT组、Ad-E1A组和Ad-E1A+RT组凋亡指数分别为(10.7±2.12)%、(21.4±3.45)%、(23.5±2.86)%和(65.8±3.62)%,Ad-E1A+RT组肿瘤细胞凋亡数目明显高于RT组,两者之间差异有统计学意义,P<0.01。免疫组化结果显示Ad-E1A+RT组的Ki-67表达明显低于RT组,P<0.01。结论E1A可通过抑制NF-κB信号通路和诱导细胞凋亡来增加鼻咽癌对放疗的敏感性。